FDA Guide to Inspections of Validation of CleaningProcesses

?FDA在檢測污染物殘留的規(guī)章指南中，已經(jīng)接受了TOC方法。

?PDA技術(shù)報告29號和 49號的附錄提到在新清潔過程中采用 TOC 方法并取代專屬性方法 

本文件采用的最壞情況方法專注于清潔過程結(jié)束時可能存在的殘余物（清潔劑）。但常見的做法是使用工藝中的污漬，或類似藥品或感興趣的化合物的替代品。 

 

強烈推薦在清潔驗證中采用TOC分析：

?相對較低的初期投資以及很低的操作和維護的費用

?使用方便，易于培訓(xùn)新使用者

?極高的靈敏度，能夠執(zhí)行低濃度的檢測，相比于其它的方法成本極低并且能夠檢測所有含碳類的殘留物質(zhì)

?快速的分析時間。

?干擾極小

?提高設(shè)備周轉(zhuǎn)時間。

 

第三章TOC分析方法的驗證

一、分析方法驗證的要求

分析方法學(xué)驗證包括線性、檢測限( MD )、定量限 (COG)、準(zhǔn)確度、精確度以及擦拭回收率。

Refrence:USP<1226>and ICHQ2(R1)
 

 

 

只有在分析方法是可靠的和可重復(fù)的時，驗證才可通過。

USP<1226>與ICH Q2（R1）闡述了分析方法的驗證程序。

 

二、TOC分析方法驗證的前提：TOC分析儀的性能確認(rèn)

?分析儀器確認(rèn)是一個過程，確保對特定測試使用分析方法是能符合目標(biāo)用途的。

?根據(jù)cGMP規(guī)定，“企業(yè)所使用的檢測方法的準(zhǔn)確度、靈敏度（檢測限）、專屬性和重現(xiàn)性（精確度）必須確立并有文件證明?！痹谶@種情況下用TOC法進行清潔過程驗證的測試之前，對分析儀器進行嚴(yán)格的確認(rèn)就尤為重要。此方法包括由USP<1058>所建議的安裝確認(rèn)、運行確認(rèn)和性能確認(rèn)（IQ/OQ/PQ）。

 

《中國藥典》（2015版）四部0682制藥用水中總有機碳測定法
 

 

 

三、系統(tǒng)適用性試驗

要求：響應(yīng)效率應(yīng)為85％～115％。

試劑：

?蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（含碳量0.500mg/L）

?1，4-對苯醌標(biāo)準(zhǔn)溶液（含碳量0.500mg/L）

 

四、分析方法驗證的要點

?專屬性（%碳）

?線性度：5點

?范圍：最高和最低之間的濃度覆蓋域

?準(zhǔn)確度：（總有機碳）

?精確度：%RSD百分標(biāo)準(zhǔn)偏差

?最低檢測限（LOD）、最低定量限（LOQ）

?可靠性：在不同的使用條件

 

五、TOC方法驗證的具體內(nèi)容

?專屬性

專屬性：專屬性是能能非常準(zhǔn)確地確定所存被測物質(zhì)。ICH Q2（R1）如能對目標(biāo)物質(zhì)進行準(zhǔn)確的定量檢測，有機碳，就顯示出這分析方法對有機碳具有專屬性。這可通過檢測具有代表性的一些有機——可選一些含有除碳、氫、氧以外元素的有機物，比如含有氯、硫、氮或磷的有機物

Example：FDA缺陷例子

“Your firm failed to establish and follow writtenprocedures to assure the cleaning and maintenance of equipment used in themanufacturing of drug products.  Forexample, cleaning validation for the CIP process vessel, which is utilized inthe aseptic formulation of the CIP process vessel, which is utilized in theaseptic formulation of trivalent bulk influenza vaccine… The study did notinclude swab sampling of the product transfer lines.”

貴司未能建立和遵循已寫的操作規(guī)程，在藥品制造中確保清潔和維護設(shè)備。例如，流感疫苗的CIP過程罐清潔驗證未包括對生產(chǎn)線的棉簽取樣實驗。

 

?線性和范圍

線性：是指測定結(jié)果與試樣中被測物濃度呈正比關(guān)系的程度。

范圍：是指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。

?定量檢查應(yīng)至少測試5個濃度范圍并且包含清潔的最低限和最高限度。

?線性的相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.98%。

?濃度范圍應(yīng)達(dá)到殘留物限度的50%-150%。

?淋洗法和棉簽法用于限度檢查時不需做線性/范圍驗證。

Example：TOC測量值和目標(biāo)物濃度的相關(guān)性

 

 

 

 

參考文獻：《藥物分析雜志》 2013.33.（3）

?精密度和準(zhǔn)確度

要顯示TOC法的精密度和準(zhǔn)確度，以含10-6碳的標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)檢測10次。這里選用此碳濃度來評估精密度和準(zhǔn)確度是因為通常殘留物的 TOC限度一般為此水平左右。在此 TOC水平，精密度為 1％，準(zhǔn)確度為±5％。

 

?回收率試驗

確定合適取樣方法（沖洗方法、擦拭方法、取樣人員的操作培訓(xùn)及檢測方法）可使污染物/殘留被有效收回，最終為驗證方法提供證據(jù)。

通過回收率試驗驗證取樣過程的回收率和重現(xiàn)性。

通常取樣回收率和檢驗方法回收率結(jié)合進行。

 

?取樣方法
 

?擦拭法回收率

可接受標(biāo)準(zhǔn) 回收率：≥50% 重現(xiàn)性：≤20%

步驟舉例：

1、準(zhǔn)備1塊500 mm ×500 mm的平整光潔的不銹鋼板。

2、在鋼板上用鋼錐劃出400 mm ×400 mm的區(qū)域每隔100 mm劃線形成16塊100 mm ×100mm的方塊。

3、配制濃度為160 mg/L的妥布霉素水溶液定量裝入噴霧器。

4、將約10 mL溶液盡量均勻地噴在400 mm ×400 mm的區(qū)域內(nèi)。

5、根據(jù)實際噴出的溶液量計算單位面積上的妥布霉素量約1μg/100mm2。
 

 

6、自然干燥或用電吹風(fēng)溫和地吹干不銹鋼板。

7、用注射用水潤濕棉簽按擦拭取樣操作規(guī)程擦拭鋼板每擦一個方塊，100 cm2換一根棉簽。在鋼板上取均布的8個方塊。

8、將棉簽分別放入試管中定量加入注射用水10 mL，加塞輕搖試管并放置10 min，使物質(zhì)溶出。然后將溶液稀釋10倍。

9、使用TOC分析儀測定此清潔驗證水樣的TOC值。
 

 

北京鈕因TOC
 

 

10、計算回收率。

擦拭回收率（%）=0.8914/1×100%=89.1% 帶入校正公式

實際計算值
 

 

 

結(jié)論：理想的回收率，說明TOC分析方法適合目標(biāo)化合物擦拭法的清潔驗證檢測。

 

?擦拭技術(shù)
 

 

 

 

注意：連貫性，固定的力度、速度和線路。

 

?淋洗法回收率

通常淋洗法限度檢查不需做回收率驗證，定量檢查應(yīng)做回收率驗證。可以利用淋洗溶劑沖洗已知量（在限度附近）的分析物確定回收率，回收率通常應(yīng)不低于95%。

淋洗法樣品可對沖洗液直接檢測，也可對沖洗液做稀釋后檢測，無論直接檢測還是稀釋檢測都應(yīng)在接到樣品后首先將樣品同空白溶劑做視覺檢查確定是否有顏色差異和異物存在，如果有述現(xiàn)象發(fā)生，可直接判定樣品不合格。

 

回收率接受程度
 

 

最低檢測限（LOD）、最低定量限（LOQ）

 

LOD/LOQ推演法

記錄低濃度純屬標(biāo)樣的實測TOC值和標(biāo)準(zhǔn)偏差（用250、500、750ppbTOC的蔗糖）

使用最小二乘線性回歸算法，確定標(biāo)樣的標(biāo)準(zhǔn)差比實測濃度的方程；確定Y軸為標(biāo)準(zhǔn)偏差，X軸為深度。

根據(jù)回歸分析確定該行的Y軸截距

Y軸截距代表零分析物濃度時的標(biāo)準(zhǔn)偽善（Y軸截距＝│S0│）

計算檢測限（LOD＝│Y軸截距│×3）

計算檢測限（LOQ＝│Y軸截距│×10）

 

參考文獻：Taylor,John K,Quality Assurance of Chemical Measurement(化學(xué)測量的質(zhì)量保證)  Lewis Publishers imprint of CRC press(1987)

 

六、TOC分析方法的注意點

?最好使用校準(zhǔn)曲線，即TOC和目標(biāo)物濃度的線性相關(guān)性是否良好。因為每一有機物的氧化效率是不同的。（除非氧化效率高，可以忽略）

?擦拭法需要同時對照溶劑（如注射用水）和空白棉簽，即擦拭空白coupons，進行TOC分析，來判定干擾程度。

?必須選擇原理、量程合適的TOC分析儀。因為清潔驗證的水樣與注射用水不同，無法預(yù)測水樣的清潔程度。